水蛭素12肽与瑞替普酶融合蛋白的反相色谱纯化及其一级结构确认

高玲; 余蓉

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水蛭素12肽与瑞替普酶融合蛋白的反相色谱纯化及其一级结构确认

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目的探索水蛭素12肽与瑞替普酶融合蛋白(HV12p-rPA)的高效液相色谱分离纯化方法,确认其一级结构.方法比较PST、Source 30、PLHP 3种不同的反相色谱介质纯化HV12p-rPA的性能,并建立反相分离纯化方法.用MALDI-TOF-MS法测定HV12p-rPA的相对分子质量(Mr),采用高效液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS),分离与分析该蛋白质经胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶酶切后得到的多肽混合物,通过二级质谱和数据库检索对分离出的各个肽段进行序列鉴定.结果 PST色谱介质性能最好.在流速2.0 mL/min条件下,采用线性梯度洗脱得到的目标蛋白质样品纯度≥95%.测得该蛋白质的精确Mr为41 473,与其理论Mr相符.肽段的实验检测值与理论平均值的数据比对表明,已检出肽段的总覆盖率≥85%.结论确定了HV12p-rPA蛋白质的反相分离纯化方法,验证了该蛋白质一级结构正确.

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来源
《食品与药品》 |2008年第1期|8-12|共5页
作者
高玲; 余蓉;
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作者单位

四川大学华西药学院,四川,成都,610041;

四川大学华西药学院,四川,成都,610041;

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正文语种 chi
中图分类蛋白质的一级结构;
关键词
水蛭素; 瑞替普酶; 融合蛋白; 分离纯化; 一级结构; 反相高效液相色谱法;

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