L-岩藻糖激酶/GDP-L-岩藻糖焦磷酸化酶的克隆表达及酶学性质研究

魏万涛; 李梦丽; 江波; 张涛

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L-岩藻糖激酶/GDP-L-岩藻糖焦磷酸化酶的克隆表达及酶学性质研究

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cqvip:核苷酸糖鸟嘌呤5’-二磷酸-β-L-岩藻糖(5′-diphospho-β-L-fucose, GDP-L-岩藻糖)是岩藻糖基化寡糖植物和细菌生物合成途径的关键中间体。从脆弱拟杆菌(Bacteroides fragilis)的基因组DNA中克隆得到L-岩藻糖激酶/GDP-L-岩藻糖焦磷酸化酶(fucose pyrophosphorylase, FKP)基因,并与载体pET-22b (+)连接,在Escherichia coli BL21(DE3)中诱导表达。利用载体上组氨酸标签对重组酶分离纯化,并进行酶学性质分析。结果表明:FKP的最适温度和最适pH分别为45℃和7.5,该酶在pH 7.5~9.5之间很稳定,在4和12℃下孵育3 h,酶的初始活性保持在90%以上。最适反应条件下,重组FKP对底物岩藻糖的Km和Kcat分别为0.44 mmol/L、(31.49±2.5) s^-1。45℃下,在底物L-岩藻糖摩尔浓度为10 mmol/L条件下反应11 h后,最终产生的GDP-L-岩藻糖为2.1 mmol/L。

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来源
《食品与发酵工业》 |2020年第9期|18-24|共7页
作者
魏万涛; 李梦丽; 江波; 张涛;
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作者单位

食品科学与技术国家重点实验室(江南大学) 江苏无锡 214122;

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正文语种 chi
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关键词
L-岩藻糖激酶/GDP-L-岩藻糖焦磷酸化酶; GDP-L-岩藻糖; 酶学性质; 克隆与表达;

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