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黄鳝Dmrt1基因5′端侧翼序列克隆和报告基因载体活性分析

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为深入研究黄鳝Dmrt1基因5′端侧翼序列在性别决定与分化中细胞通路之间的转录调控作用。本研究以黄鳝基因组DNA为模板,PCR扩增出Dmrt1基因5′端侧翼序列,并对该序列进行了生物信息学分析,然后将克隆获得的Dmrt1基因5′端侧翼序列构建到PGL3-enhancer载体中,命名为pGL3-enhancer-Dmrt1,最后将pGL3-enhancer-Dmrt1和内参质粒pRL-TK共转染至HEK293细胞,采用双荧光素酶检测系统对Dmrt1基因5′端侧翼的启动活性进行了检测。实验结果显示:克隆获得的Dmrt1基因5′端侧翼序列为1519 bp;利用TESS-Transcription Element Search System转录因子结合位点在线预测数据库对黄鳝Dmrt1基因5′端侧翼序列进行预测分析结果表明,该序列存在AP-1、Oct-1、C/EBPa和GATAx等真核生物通用的转录因子结合位点以及与性别相关基因的蛋白结合位点,如SRY、Sox3和Sox5等;双荧光素酶检测结果显示,该5′端侧翼序列具有启动活性。

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来源
《淡水渔业》 |2022年第3期|52-58|共7页
作者
杜怡芳; 朱信超; 李贤慧; 曲宪成;
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作者单位

上海海洋大学水产与生命学院/上海海洋大学水产科学国家级实验教学示范中心/上海海洋大学上海水产养殖工程技术研究中心;

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正文语种 chi
中图分类水产动物学;
关键词
黄鳝(Monopterus albus); Dmrt1基因5′端侧翼启动子序列; 克隆; 报告基因; 表达活性;

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