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体外诱导大鼠骨髓基质细胞向心肌细胞的分化

         

摘要

目的通过体外诱导研究骨髓基质细胞(MSC)向心肌样细胞的分化和心肌细胞特异性标志的表达.方法抽取雄性SD大鼠骨髓,进行体外培养和连续传代,获得较纯的MSC.采用第8代的MSC,以去甲基化药物-5-氮杂胞苷进行体外诱导,相差显微镜下观察其形态变化,通过流式细胞仪(FACS)分析细胞形态比例,以免疫组化方法鉴定心肌特征性蛋白Desmin和肌钙蛋白T(cTnT)表达,并通过RT-PCR鉴定心肌特异因子基因的表达.结果诱导前MSC多呈扁平多突起形态,诱导后形态发生变化,10 d细胞呈长梭形,20 d后细胞之间形成连接,排列方向渐趋一致,1月时出现肌管样结构.FACS检测发现诱导后MSC形态构成发生变化,以形态较小细胞为主.免疫组化检测DesmiB阳性比例近35%,有cTnT免疫荧光阳性细胞出现,约占10%.RT-PCR显示诱导后MSC后有GATA-4、ANP和a-MHC基因表达.结论成体中的MSC在一定诱导条件下可以表现心肌样特征,是临床心肌细胞成形术理想的移植细胞.

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