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苦参碱致HepaRG细胞毒性研究

         
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目的 研究苦参碱对HepaRG细胞增殖、周期及凋亡的影响并初探其机制.方法采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐[3-(4,5-dimethyl thiazol-2-yl-)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT]法检测不同浓度(0.5,1,2,4 mg/mL)苦参碱对HepaRG细胞活力的影响;检测苦参碱给药后,HepaRG细胞培养上清液中的乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活力;采用4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(4′,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)染色观察HepaRG细胞形态学变化;利用流式细胞仪检测苦参碱对HepaRG细胞内活性氧和线粒体膜电位变化;利用Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡变化;利用PI/RNase检测细胞周期变化.结果MTT和LDH结果显示苦参碱能明显抑制HepaRG细胞活力,并呈时间与剂量依赖关系;DAPI染色发现随着药物浓度升高,细胞形态发生明显变化,出现核固缩,呈亮蓝色,形成凋亡小体等.流式结果表明苦参碱能使HepaRG细胞内活性氧升高,线粒体膜电位水平下降;与对照组相比,给药组HepaRG细胞出现明显的凋亡细胞,且细胞凋亡率随苦参碱浓度增大而逐渐升高;给药组HepaRG细胞处于G0/G1期的细胞数减少,S期的细胞增多,表明苦参碱能将HepaRG细胞的细胞周期阻滞在S期.结论苦参碱在体外对HepaRG细胞有明显的细胞毒性作用,其机制可能是通过增加活性氧,使线粒体功能受损,改变细胞周期分布,诱导细胞凋亡.

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