人Ⅱ型高尔基体膜蛋白73多克隆抗体的制备及免疫学鉴定

吴玉; 蔡媛媛; 徐霞; 林云恩

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人Ⅱ型高尔基体膜蛋白73多克隆抗体的制备及免疫学鉴定

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目的制备人Ⅱ型高尔基体膜蛋白73(Golgi protein 73,GP73)的多克隆抗体,为进一步研究GP73的功能奠定基础.方法利用重组原核表达载体PET-32a-GP73在大肠杆菌BL21中诱导表达,利用切胶方法回收纯化蛋白,并免疫新西兰兔制备多克隆抗体.制备的抗体经硫酸铵沉淀纯化后,用ELISA法和Western blot对多克隆抗体进行效价和特异性检测,用免疫组织化学法(IHC)检测纯化抗体在不同肝组织中识别GP73的能力.结果 GP73蛋白表达成功,并成功获得纯化的GP73蛋白及兔抗GP73多克隆抗体;ELISA法测定多克隆抗体效价>16 000;Western blot证明多克隆抗体的特异性良好;IHC显示GP73蛋白在正常肝组织中仅表达于胆管上皮细胞,而在肝癌组织中表达于肝癌细胞和胆管上皮细胞.结论成功获得了纯化的GP73蛋白及高效价的多克隆抗体,肝脏组织的IHC验证了其良好的特异性.

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来源
《广东医学》 |2013年第2期|181-183|共3页
作者
吴玉; 蔡媛媛; 徐霞; 林云恩;
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作者单位

广州医学院检验系,广州,510182;

广州医学院检验系,广州,510182;

广州医学院检验系,广州,510182;

广州医学院第一附属医院病理科,广州,510120;

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正文语种 chi
中图分类
关键词
高尔基体膜蛋白73; 肝癌; 多克隆抗体;

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