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“DC细胞工厂”--脐带血CD34+造血干细胞来源的DC的大量制备

         
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背景：树突状细胞(Dendritic Cell，DC)充当着免疫系统中的“警察”角色，它能够识别体内异常抗原信息并通过激活初始T细胞而诱导特异性的免疫应答。以DC为基础制备的肿瘤疫苗能有效的构筑抗肿瘤免疫屏障，因此DC被认为是充满前景的免疫治疗工具。作为原料细胞，大量成熟，功能均一的DC 细胞是制备DC疫苗的必须条件，而临床上广泛应用的DC细胞来自于自体外周血，数量在106~108之间，无法充分满足临床应用。因此，探索新的大量制备DC的方法成为临床上迫切的需求。目的：本实验旨在探索新的由CD34+造血干细胞大量诱导DC细胞生成的方法，并通过体外实验证实这种CD34-DC肿瘤疫苗相比外周血单核细胞来源的DC疫苗(PBMC-DC)具有类似的或者更好的诱导抗肿瘤免疫应答的能力。方法：分离脐带血CD34+造血干细胞并利用GM-CSF/SCF进行连续30 d的扩增培养，期间通过贴壁持续收获DC。外周血单核细胞诱导的DC作为对照。对比两种来源的DC形态，表型和包括抗原吞噬，混合淋巴增殖，细胞因子分泌，趋化能力的功能特征。分别将其制备成肿瘤DC疫苗，并对比体外诱导的CTL IFN-γ分泌能力和针对肿瘤靶细胞的细胞毒性。结果：1) GM-CSF/SCF细胞因子组合连续培养CD34+细胞30 d后，共收获~1010总细胞量和~109的DC。与PBMC-DC相比，具有类似的形态特征；2)成熟状态时， CD34-DC与PBMC-DC具有类似的细胞表型(CD80， CD83，CD86，HLA-DR)，而未成熟时CD34-DC表型好于PBMC-DC，尤其是CD80表达较早上调；3)无论是新鲜的还是冻存后复苏的，CD34-DC和PMBC-DC在GM-CSF/IL-4培养的第5天吞噬功能最强，是抗原负载的最佳时间窗；4)鸡尾酒式细胞因子作用下， CD34-DC较PBMC-DC具有更强的IL-12p70和IL-10的分泌能力，且前者诱导的CTL IFN-γ分泌水平更高，同时5)其表现出了更强的细胞毒作用；6)正常健康孕妇脐带血中CD34+造血干细胞具有稳定的增殖和向DC分化的潜能。结论：我们建立了一套由脐带血造血干细胞诱导大量DC生成的方法并称之为“DC工厂”。由其制备的DC抗肿瘤疫苗是将来能够用于临床的充满前景的免疫刺激剂。

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