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首页> 中文期刊> 《安徽农业科学》 >水牛受精卵胞质内注射转基因的初步研究

水牛受精卵胞质内注射转基因的初步研究

         
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摘要

[目的]旨在探讨通过向水牛受精卵胞质内注射外源DNA实现转基因的可行性.[方法]水牛卵母细胞体外成熟20～22 h后随机分为2组:①在体外受精7～10h或18～20h后向卵细胞质内注入约7.5 pl 50 μg/ml含线性EGP片段的DNA溶液;②分别注入单个精于与约7.5 pl 50μg/ml含线性ECFP片段的DNA混合物,观察外源基因在胚胎发育过程中的表达情况.[结果]受精卵胞质内注射的早期胚胎基因表达率、囊胚基因表达率与ICSI-Tr差异不显著(P＞0 05),且IVF7～10 h时注射的分裂率、早期胚胎基因表述率均显著高于18～20 h(P＜0.05).[结论]水牛IVF受精卵胞质内注射外源基因能获得转基因胚胎,且IVF后7～10 h注射的效果优于IVF后18～20 h注射.%[Objective] This study aimed to investigate the feasibility of transgenesis by injecting exogenous DNA into zygote cytoplasm of buffalo. [Method ] Buffalo oocytes were randomly divided into two groups 20 -22 h after in vitro maturation. One group of oocytes was introduced with about 7. 5 pl of 50 μg/ml DNA solution containing linear EGFP fragment by cytoplasmic injection 7 - 10 h or 18 - 20 h after in vitro fertilization (IVF); the other group of ooctyes was introduced with mixture of a single buffalo sperm and about 7.5 pl of 50 μg/ml DNA solution containing linear ECFP fragment by cytoplasmic injection ( generally called ICSI-Mediated Gene Transfer, ICSI-Tr). Expression of exogenous DNA was observed and recorded during the process of embryonic development. [Result] Early embryonic gene expression efficiency and blas-tocyst gene expression efficiency in IVF group showed no significant difference compared with that in ICSI-Tr group (P >0.05). In addition, the cleavage rate and early embryonic gene expression efficiency in IVF group were significantly higher with injection at 7 - 10 h pos1 IVF than 18 - 20 h post IVF (P < 0.05 ). [Conclusion ] These results indicate that transgenie buffalo embryos can be generated by injecting exogenous DNA into cytoplasm of IVF oocytes, and the optimal injection time is 7 - 10 h post IVF.

著录项

  • 来源
    《安徽农业科学》 |2012年第19期|10166-10169|共4页
  • 作者

    陈自洪; 崔奎青; 孟凡丽; 刘玉兵; 王丹; 陆凤花; 石德顺;

  • 作者单位

    广西大学亚热带生物资源保护利用国家重点实验室;

    广西南宁530004;

    广西壮族自治区人口和计划生育研究中心;

    广西南宁530021;

    广西大学亚热带生物资源保护利用国家重点实验室;

    广西南宁530004;

    广西大学亚热带生物资源保护利用国家重点实验室;

    广西南宁530004;

    广西大学亚热带生物资源保护利用国家重点实验室;

    广西南宁530004;

    广西大学亚热带生物资源保护利用国家重点实验室;

    广西南宁530004;

    山东潍坊市人民医院生殖医学中心;

    山东潍坊261100;

    广西大学亚热带生物资源保护利用国家重点实验室;

    广西南宁530004;

    广西大学亚热带生物资源保护利用国家重点实验室;

    广西南宁530004;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 水牛;
  • 关键词

    水牛; 受精卵; 胞质内注射; 转基因;

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