铜完全抗原的合成·鉴定及单克隆抗体的制备

刘文迪; 周玉; 卢士英; 任洪林; 李岩松; 柳增善; 宋芳; 郝亚明

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铜完全抗原的合成·鉴定及单克隆抗体的制备

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[Objective] The aim was to gain the monoclonal antibody against copper ions. [ Method] The carrier protein BSA, OVA were separately chelated with bifunctional chelating agent Isothiocyanobenzyl-EDTA (ITCBE) and linked with ion copper to gain the completed Im-munogen (Cu-ITCBE-BSA) and the detection Immunogen (Cu-ITCBE-OVA). Non-denaturing polyacrylamide gel electrophoresis was used for the identification of the completed antigen. By using cell fusion and limiting dilution, a stable hybridoma strains secreting anti Cu2+ was obtained. [Result] A stable hybridoma strains (4A6) secreting anti Cu2* monoclonal antibody was obtained. The sub-class of antibody was IgG1. The liter of cell culture supernatant and ascites were 1:1024 and 1:6.4 × 105 respectively. The ascites was purified by affinity chroma-tography, the purity was 95%. [ Conclusion] A monoclonal antibody against copper ions has been obtained, which provided foundations for the detection of copper ions in environmental water samples.%[目的]获得抗Cu2+的单克隆抗体.[方法]以异硫氰酸苄基乙二胺四乙酸( ITCBE)为双功能螯合剂,使Cu2+分别与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)偶联,获得免疫原(Cu-ITCBE-BSA)和检测原(Cu-ITCBE-OVA).用非变性聚丙烯凝胶电泳鉴定偶联结果.免疫Balb/C小鼠,通过细胞融合,获得能稳定分泌抗Cu2的杂交瘤细胞株,并通过亲和层析法纯化腹水获得抗Cu2+的单克隆抗体.[结果]获得了1株能稳定分泌抗Cu2+的单克隆抗体的细胞株(4A6),所分泌的抗体亚类为IgG1,细胞培养上清效价可达1:1.0×103,腹水效价可达1:6.4×105.以该细胞株接种Balb/C小鼠腹腔,获得抗Cu2+的腹水型单抗；该腹水经过亲和层析法纯化后,纯度可达95％.[结论]获得了抗Cu2+的单克隆抗体,为环境水样中Cu2+的免疫学检测奠定基础.

著录项

来源
《安徽农业科学》 |2011年第29期|18072-18074|共3页
作者
刘文迪; 周玉; 卢士英; 任洪林; 李岩松; 柳增善; 宋芳; 郝亚明;
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作者单位

吉林大学人兽共患病教育部重点实验室;

吉林大学畜牧兽医学院;

吉林长春130062;

吉林大学人兽共患病教育部重点实验室;

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吉林长春130062;

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吉林大学畜牧兽医学院;

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正文语种 chi
中图分类金属矿;
关键词
Cu2+; 抗原合成; 鉴定; 单克隆抗体;

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