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金堂黑山羊FSHR启动子克隆及转录活性分析

         
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摘要

[目的]分析金堂黑山羊FSHR启动子的克隆和转录活性,为分子水平研究金堂黑山羊FSHR的可变剪接提供基础.[方法] 从金堂黑山羊子宫中提取总的DNA, 设计1对引物用于扩增FSHR启动子片段,并进行测序和同源性分析.将克隆得到的FSHR启动子片段替换CMV启动子构建pcFSHRB2表达载体,分别将pcFSHRB1和pcFSHRB2表达载体转染到HEK293细胞中,用2 mIU/ml FSH处理细胞,在处理后24、48 h分别检测环磷酸腺苷(cAMP)的产量,用以分析FSHR的转录活性.[结果]克隆得到的FSHR启动子序列与鸡和家鼠的同源性分别为34.2%和41.6%,推测其转录起始位点为-576 bp处,其上游含有2 个TATA-box、4个CAAT-box、1 个E-box和1个W1-box.所构建的pcFSHRB2和pcFSHRB1表达载体转染细胞后用FSH处理24和48 h时产生的cAMP的量分别为299.581 3、125.528 1 pmol/L和120.057 1、109.940 7 pmol/L.[结论]金堂黑山羊的FSHR启动子是一个典型的Ⅱ型真核启动子,是一个强启动子.

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