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hbFGF基因的克隆及其植物双元表达载体的构建

         

摘要

[目的]为利用植物基因工程技术获取hbFGF基因奠定基础.[方法]采用RT-PCR方法克隆hbFGF基因,将其插入双元表达载体pCambia1301中,构建植物表达载体pCambia1301-hbfgf,并将该表达载体导入发根农杆菌菌株C58C1.[结果]1%琼脂糖凝胶电泳结果显示,hbFGF基因被成功连接到克隆载体pMD18-T上,且重组质粒pMD18-T-hbfgf的DNA测序结果与GenBank中登录的hbFGF cDNA序列完全一致;双元表达载体重组质粒pCambia1301-hbfgf经BamHI消化后进行1%琼脂糖凝胶电泳,结果显示,电泳图谱中出现1 200、10 000 bp 2个片段,说明hbFGF基因已被成功克隆到植物表达载体pCambia1301中;农杆菌转化子PCR产物电泳图谱中483 bp处出现条带,说明pCambia1301-hbfgf已被转入农杆菌中.[结论]该研究成功获得了可直接用于遗传改良的工程菌pCambia1301-hbfgf-C58C1.

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