利用重组PCR技术构建适合真菌ATMT转化的GFP基因表达载体

张运峰; 范永山; 冯志娟; 林满丽; 董金皋

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利用重组PCR技术构建适合真菌ATMT转化的GFP基因表达载体

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[目的]构建适合真菌ATMT转化的GFP基因表达载体.[方法]利用含有GFP基因和Nos终止子的A2GFP质粒和含有普遍适于真菌基因表达的构巢曲霉启动子(Ptrpc)的pUCATPH质粒,通过重组PCR技术构建Ptrpc-GFP-Nos重组基因,然后插入到农杆菌质粒pCAMBIA 1300的多克隆位点,构建适合真菌ATMT转化的GFP基因表达载体,并对其进行酶切和测序鉴定.[结果]通过重组PCR技术,仅通过Ptrpc启动子基因扩增、GFP-Nos基因扩增、Ptrpc-GFP-Nos重组基因扩增、1次双酶切、1次连接和转化,就成功地构建了适合真菌ATMT转化的GFP基因的表达载体pCAMBIA 1300-PGN,不需要构建中间载体,并大大简化了连接步骤.该载体经过PCR、酶切和测序鉴定,结构正确,连接准确,序列无误.[结论]该研究为真菌ATMT突变体的构建和快速检测奠定了基础.

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来源
《安徽农业科学》 |2009年第27期|12972-12974|共3页
作者
张运峰; 范永山; 冯志娟; 林满丽; 董金皋;
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作者单位

河北农业大学真菌毒素实验室;

河北保定;

071000;

唐山师范学院生命科学系;

河北唐山;

063000;

唐山师范学院生命科学系;

河北唐山;

063000;

唐山师范学院生命科学系;

河北唐山;

063000;

唐山师范学院生命科学系;

河北唐山;

063000;

河北农业大学真菌毒素实验室;

河北保定;

071000;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类农业生物工程;
关键词
重组PCR技术; 绿色荧光蛋白; ATMT转化; 表达载体;

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