寒兰基因组DNA ISSR-PCR反应条件的优化

孙小琴; 李恩香; 贾文杰; 彭德镇; 孔令杰; 杨柏云

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寒兰基因组DNA ISSR-PCR反应条件的优化

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以改良的CTAB法提取的寒兰(Cymbidium kanran Makino)基因组DNA为模板,通过单因子试验建立最适的寒兰的ISSR-PCR反应体系.结果表明,适宜寒兰ISSR-PCR反应体系的扩增条件为:25 μl PCR 反应体积中,1×PCR buffer,2.0 mmol/L MgCl2,300 ng 模板 DNA,200 μmol/L dNTP,1.40 U Taq DNA 聚合酶,0.4 μmol/L 引物.最佳扩增程序为:94 ℃预变性 5 min,然后进行 40 个循环:94 ℃变性 30 s,复性温度根据各引物的Tm值略低1～2 ℃,30 s,72 ℃延伸 50 s,循环结束后 72 ℃延伸7 min.

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来源
《安徽农业科学》 |2009年第29期|14044-1404614050|共4页
作者
孙小琴; 李恩香; 贾文杰; 彭德镇; 孔令杰; 杨柏云;
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作者单位

南昌大学生命科学学院;

江西南昌;

330031;

南昌大学生命科学学院;

江西南昌;

330031;

南昌大学生命科学学院;

江西南昌;

330031;

南昌大学生命科学学院;

江西南昌;

330031;

南昌大学生命科学学院;

江西南昌;

330031;

南昌大学生命科学学院;

江西南昌;

330031;

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正文语种 chi
中图分类兰科植物;
关键词
寒兰; ISSR-PCR反应; 遗传多样性;

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