番茄γ-生育酚甲基转移酶基因的克隆与分析

邹礼平

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番茄γ-生育酚甲基转移酶基因的克隆与分析

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[目的]为进一步研究γ-生育酚甲基转移酶(TMT)基因的功能奠定基础.[方法]以拟南芥γ-TMTcDNA为信息探针,在GenBankdbEST数据库中搜索与其高度同源的番茄EST序列,通过人工序列拼接得到番茄γ-TMT的cDNA序列.据此拼接序列设计1对特异引物,以番茄叶片cDNA第1链产物为模板进行RT-PCR,回收目的片段,转化到大肠杆菌DH5α进行TA克隆.最后对获得的阳性克隆进行测序,分析测序结果与其他物种中该基因之间的同源性,进行氨基酸序列比对及系统进化分析.[结果]经RT-PCR扩增出1300bp左右的片段,成功克隆了番茄γ-TMT基因.克隆片段全长1354bp,包含1个1089bp的完整开放读码框,与拼接序列完全一致.番茄γ-TMT基因编码的氨基酸序列与马铃薯、小麦、玉米和拟南芥的γ-TMT基因的同源性分别达89%、75%、75%和70%.系统进化分析表明,番茄与马铃薯的γ-TMT基因有较近的亲缘关系.[结论]该试验中克隆的番茄γ-TMT基因编码的蛋白质分子量为39.8kD,等电点为8.28.

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来源
《安徽农业科学》 |2008年第2期|437-439525|共4页
作者
邹礼平;
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作者单位

孝感学院生命科学技术学院;

湖北孝感;

432000;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类转化及克隆;
关键词
番茄; γ-生育酚甲基转移酶; 维生素E; 生物合成; 基因克隆;

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