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大鼠脑动脉平滑肌细胞的体外培养与鉴定

         

摘要

目的 建立大鼠颅内脑动脉平滑肌细胞(smooth muscle cells,SMCs)的体外培养方法.方法 无菌条件下分离大鼠脑基底动脉,去除血管外膜后剪成约0.2mm的小段,分别用0.1%Ⅰ型胶原酶、0.125%胰蛋白酶消化,细胞用含20%胎牛血清的DMEM/F12培养基进行培养.采用人工刮除法及差速贴壁法纯化细胞.SMCs通过形态学观察及α-平滑肌肌动蛋白免疫细胞化学方法鉴定.结果 原代培养3d后细胞开始贴壁,2w后细胞呈梭形,汇合后具有典型的"峰-谷"生长特点.传代培养的细胞保持上述特征,第5代细胞经α-平滑肌肌动蛋白表达鉴定,纯度达97%以上.台盼蓝排斥实验检测细胞存活率>95%.结论 这种方法操作简单、结果可靠、成本低廉,可为颅内动脉粥样硬化等脑血管病机制和治疗的研究提供适宜的体外培养细胞模型.

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