类弹性蛋白多肽-红色荧光蛋白融合蛋白的表达纯化及细胞相容性

刘宁; 崔梅英; 王明月; 杨泽斌; 王浩; 毛禹; 方楷漪; 夏薇; 关新刚

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目的构建携带红色荧光蛋白(mCherry)标签的类弹性蛋白(ELP)原核表达载体,并表达纯化ELPmCherry融合蛋白,探讨ELP-mCherry融合蛋白与细胞的相容性.方法对利用限制性内切酶Xba I和Xho I对mCherry质粒和pET28a-ELP载体同时进行双酶切,将酶切产物回收、连接并转化DH5α大肠杆菌感受态细胞,构建重组质粒pET28a-ELP-mCherry;将重组质粒转化到BL21(DE3)大肠杆菌感受态细胞中,诱导表达ELPmCherry融合蛋白;利用可逆转变循环(ITC)法对ELP-mCherry融合蛋白进行纯化;通过MTT法探讨ELPmCherry融合蛋白与人胚肾上皮细胞HEK293T和小鼠胚胎成纤维细胞NIH3T3的细胞相容性.结果DNA测序结果显示成功构建了ELP-mCherry原核表达载体;利用BL21(DE3)大肠杆菌表达系统成功表达ELP-mCherry融合蛋白,通过ITC法纯化得到了高纯度融合蛋白.MTT结果表明:在所有ELP-mCherry蛋白测试浓度下,HEK293T和NIH3T3细胞存活率接近或超过100%.结论成功构建ELP-mCherry原核表达载体,成功表达并纯化得到高纯度的ELP-mCherry融合蛋白,ELP-mCherry融合蛋白在HEK293T和NIH3T3细胞中具有良好的细胞相容性.

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来源
《北华大学学报：自然科学版》 |2021年第1期|42-46|共5页
作者
刘宁; 崔梅英; 王明月; 杨泽斌; 王浩; 毛禹; 方楷漪; 夏薇; 关新刚;
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作者单位

北华大学医学技术学院;

吉林吉林132013;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类植物基因工程;
关键词
类弹性蛋白多肽; 红色荧光蛋白; 原核表达; 蛋白纯化; 细胞相容性;

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