重组人白细胞介素7在HEK293细胞中稳定分泌表达

李向茸; 王兴陇; 令瑛; 徐雷; 李琼毅; 张海霞; 包晓婧; 冯若飞

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重组人白细胞介素7在HEK293细胞中稳定分泌表达

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The objective of this study was to construct eukaryotic expression vector of human interleukin-7, and make it expressed in HEK293 cells. IL-7 gene was amplified by PCR from the lentivirus expression vector pLV-CMV-EF1-GPL-rIL-7, and then cloned into the pcDNA3. 1 vector to construct eukaryotic expression vector pcDNA3. 1-rIL-7. The constructed plasmid was transfected into the HEK293 cells via LipofectamineTM 2000 separately and screened by G418 continuously. By G418 screening and monoclonal, stably se-creting expression IL-7 cell line HEK293-rIL-7 was obtained, successfully constructed eukaryotic expression vector pcDNA3. 1-rIL-7, and expressed in HEK293 cells. By cell cloning, one cell line with high secretory expression was obtained, named HEK293-rIL7-2G3. The content of IL-7 in the supernatant after 48 h was 3. 2 ng/mL.%通过构建人白细胞介素7的重组真核表达载体,转染HEK293细胞,实现IL-7在HEK293细胞中的稳定分泌表达,为生产试剂级的IL-7奠定基础.从质粒pLV-CMV-EF1-GP-rIL-7中扩增人IL-7全长基因,并将其构建于pcDNA3.1真核表达载体上.利用脂质体法将重组质粒转染HEK293细胞,经G418筛选及单克隆,获得稳定分泌表达IL-7的HEK293-rIL-7细胞系.成功构建真核表达质粒pcDNA3.1-rIL-7,并实现IL-7在HEK293细胞上的稳定分泌表达,最终获得了1株表达量较高的细胞株,命名为HEK293-IL7-2G3细胞,培养48 h的细胞上清中IL-7的含量为3.2 ng/mL.为进一步实现人白细胞介素7在哺乳动物细胞中的分泌表达及药物开发奠定基础.

著录项

来源
《生物学杂志》 |2017年第5期|24-28|共5页
作者
李向茸; 王兴陇; 令瑛; 徐雷; 李琼毅; 张海霞; 包晓婧; 冯若飞;
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作者单位

西北民族大学生物工程与技术国家民委重点实验室,兰州 730030;

甘肃省动物细胞工程技术研究中心,兰州 730030;

西北民族大学生命科学与工程学院,兰州 730030;

西北民族大学生命科学与工程学院,兰州 730030;

西北民族大学生命科学与工程学院,兰州 730030;

西北民族大学生命科学与工程学院,兰州 730030;

西北民族大学生物工程与技术国家民委重点实验室,兰州 730030;

甘肃省动物细胞工程技术研究中心,兰州 730030;

西北民族大学生命科学与工程学院,兰州 730030;

西北民族大学生物工程与技术国家民委重点实验室,兰州 730030;

甘肃省动物细胞工程技术研究中心,兰州 730030;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类基因工程（遗传工程）;
关键词
白细胞介素7; 转染; 绿色荧光蛋白; 分泌表达;

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