缺铁玉米根cDNA文库的构建及蛋白和cDNA差异比较

印莉萍; 祁晓廷; 刘祥林; 孙进; 吴娟; 邱泽生

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缺铁玉米根cDNA文库的构建及蛋白和cDNA差异比较

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采用异硫氰酸胍酚氯仿法分离铁胁迫玉米根总ＲＮＡ，然后采用寡聚ｄＴ纤维素层析柱法纯化Ｐｏｌｙ（Ａ）＋ＲＮＡ．用含有ＸｈｏＩ位点的ｌｉｎｋｅｒｐｒｉｍｅｒ锚定合成ｃＤＮＡ第一条链后，采用替代法合成第二条链，接着连接上ＥｃｏＲＩＡｄａｐｔｅｒ以便定向重组到载体上．ｃＤＮＡ经过ＸｈｏＩ消化和分级分离后，带有ＸｈｏＩ和ＥｃｏＲＩ粘性末端的ｃＤＮＡ定向重组到λＺＡＰ表达载体的ＸｈｏＩ和ＥｃｏＲＩ位点上．经体外包装，重组的噬菌体转导宿主菌ＸＬ１ＢｌｕｅＭＲＦ，最终获得滴度为４－５ ×１０５ｐｆｕ／ｕｇ的λＺＡＰ表达ｃＤＮＡ文库．通过差异筛选法和质膜双向电泳验证了缺铁和加铁条件下ｃＤＮＡ

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来源
《首都师范大学学报：自然科学版》 |1999年第4期|54-60|共7页
作者
印莉萍; 祁晓廷; 刘祥林; 孙进; 吴娟; 邱泽生;
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作者单位

首都师范大学生物系;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类转化及克隆;
关键词
铁胁迫cDNA文库; 差异筛选; 质膜蛋白; 玉米; 构建;

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