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白毛藤乙醇提取物通过Akt-mTOR途径调节卵巢癌的增殖和糖酵解

         
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目的:研究白毛藤乙醇提取物通过Akt-mTOR途径调节卵巢癌的增殖和糖酵解的机制。方法:体外培养卵巢癌SKOV3细胞,分为0、0.1、0.25、0.5、1.0、2.5、5、10μg/mL白毛藤乙醇提取物组和紫杉醇(1μmol/L)阳性对照组共9组。MTT法检测细胞活力,LDH细胞毒性检测试剂盒检测LDH泄漏量,流式细胞仪检测细胞周期,Hoechst 33258实验检测细胞凋亡情况,相应试剂盒测定葡萄糖摄取量、乳酸生成量。Western blot检测细胞cleaved Caspase-3、cleaved PARP、PKM2、GLUT-1、LDHA、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、Beclin1、p62、p-Akt、Akt、p-mTOR、mTOR蛋白表达。结果:作用24、48 h,与空白对照组比较,0.1、0.25、0.5、1.0、2.5、5、10μg/mL白毛藤乙醇提取物对SKOV3细胞活性均有抑制作用,超过1.0μg/mL的白毛藤乙醇提取物显著增加SKOV3细胞的LDH泄漏量;0.25、0.5μg/mL白毛藤乙醇提取物组卵巢癌细胞周期阻滞在G_(0)/G_(1)期,(P<0.05或P<0.01);0.1、0.25、0.5μg/mL白毛藤乙醇提取物组卵巢癌细胞葡萄糖摄取量、乳酸生成量均显著降低。Western blot检测结果显示,与空白对照组比较,0.1μg/mL白毛藤乙醇提取物组卵巢癌SKOV3细胞中PKM2、p62、p-mTOR/mTOR蛋白表达显著降低,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1蛋白表达显著升高(P<0.05或P<0.01);0.25、0.5μg/mL白毛藤乙醇提取物组PKM2、GLUT-1、LDHA、p62、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR蛋白表达显著降低,cleaved Caspase-3、cleaved PARP、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1蛋白表达显著升高(P<0.05或P<0.01)。Hoechst 33258实验结果显示卵巢癌细胞凋亡率随着白毛藤乙醇提取物浓度的增加递增。结论:白毛藤乙醇提取物可通过抑制Akt-mTOR途径,上调cleaved Caspase-3、cleaved PARP、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1的蛋白表达,下调PKM2、GLUT-1、LDHA蛋白表达,诱导卵巢癌SKOV3细胞凋亡和自噬,抑制糖酵解代谢,从而发挥抗卵巢癌的作用。

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