抗日本脑炎病毒单克隆抗体2F2重链可变区基因的克隆与鉴定

寇甜甜; 雷迎峰; 丁天兵

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目的克隆抗日本脑炎病毒单克隆抗体2F2重链可变区（VH）基因。方法从分泌抗日本脑炎病毒单克隆抗体2F2的杂交瘤细胞中提取总RNA,通过RT-PCR扩增重链可变区基因。凝胶回收纯化后与pMD-18T载体连接,重组载体转化于宿主菌DH5α,挑取菌落PCR鉴定后测序并进行分析。测序正确的质粒经EcoRI和XhoI酶切、纯化后的产物和原核表达载体pRSET A在SolutionI作用下连接,转化BL21（DE3）对重组质粒进行表达。经Tricine-十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）检测重链可变区表达产物的表达水平,用ELISA检测表达产物能否与日本脑炎病毒结合。结果确定了2F2VH基因序列,长度为354 bp,编码118个氨基酸,第22位和第96位残基是维持抗体结构的半胱氨酸,含有特异性CDR1、CDR2和CDR3区域,符合鼠源性免疫球蛋白基因的特征。ELISA检测结果显示原核表达的2F2重链可变区产物可与日本脑炎病毒特异性结合。结论获得了抗日本脑炎病毒单克隆抗体2F2重链可变区基因。

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来源
《中国医师杂志》 |2014年第5期||共页
作者
寇甜甜; 雷迎峰; 丁天兵;
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作者单位

第四军医大学基础部微生物学教研室;

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正文语种 chi
中图分类医学免疫学;
关键词
脑炎病毒; 日本; 抗体; 单克隆; 克隆; 分子;

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