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荧光实时定量PCR检测铜绿假单胞菌方法建立及价值

         

摘要

目的建立荧光实时定量PCR(FQ-PCR)定量测定铜绿假单胞菌的方法,检测该方法的灵敏度并与传统细菌培养比较其特异性吻合率。方法选择铜绿假单胞菌的oprI基因为目的基因设计探针引物,建立Taqm an探针FQ-PCR体系定量检测5种标准菌株、3种病毒株、白色念珠菌、肺炎支原体、人基因组DNA及临床培养96株菌株。结果31株铜绿假单胞菌、铜绿假单胞菌与其它菌种或人全血的混合液均产生特异扩增信号,标准曲线的相关系数为0.997;其他菌种(76株)无扩增;乙肝病毒、巨细胞病毒及肺炎支原体及健康人全血均无扩增,与传统培养相比特异性吻合率达100%,铜绿假单胞菌标准株按等级浓度稀释后其拷贝数也呈等级梯度递减,实际可检测到的最小菌落数为100个/m l,全程检测<4 h。结论荧光实时定量法检测oprI基因可以运用于铜绿假单胞菌的快速检测。

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