人体肝脏靶向性新型AAV血清型载体的研发

宁秦洁; 陈颖; 闫梦迪; 胡泽岚; 吴侠; 杜增民; 郑静; 肖啸

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通过DNA shuffling技术选择8种AAV(AAV1~AAV4,AAV6~AAV9)cap基因序列进行cap基因的DNA改组,获得AAV突变体基因库。将突变体基因库插入到含有AAV2Rep基因和ITR序列的质粒中,最终获得了大于107的独立克隆(具有全套AAV基因组序列)。通过转化实验获得随机感染质粒文库(pIRC)。将所得质粒经过共转染HEK293细胞,72 h后收集纯化病毒,获得感染性AAV文库。利用野生型5型腺病毒(Wild Type Ad5,wt Ad5)辅助感染人肝癌Hep G2细胞,进行筛选后,最终在肝细胞中富集获得1种新型AAV血清载体AAVXL12。通过将携带GFP基因的不同AAV血清型载体感染Hep G2细胞,观察到不同程度的绿色荧光的表达,最终显示筛选到的AAV血清型载体AAVXL12介导的GFP基因表达效果最好,荧光强度最强。

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来源
《华东理工大学学报：自然科学版》 |2020年第3期|404-410|共7页
作者
宁秦洁; 陈颖; 闫梦迪; 胡泽岚; 吴侠; 杜增民; 郑静; 肖啸;
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作者单位

华东理工大学药学院;

神经分子药理学实验室;

上海200237;

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正文语种 chi
中图分类肿瘤学;
关键词
腺相关病毒(AAV); 基因治疗; 新型AAV血清型; DNA shuffling; 靶向; 肝脏细胞;

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