柱状黄杆菌胶原蛋白酶的克隆与表达

张立强; 谢海侠; 李楠; 聂品

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柱状黄杆菌胶原蛋白酶的克隆与表达

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利用PCR方法从柱状黄杆菌(Flavobacterium.columnare)G4株中克隆了1个胶原蛋白酶基因(GenBank登录号EF501979).同源性比对发现该基因与柱状黄杆菌的另外1种胶原酶基因(GenBank登录号EAZ95511.1)最为相近,有84%的一致性和93%的相似性.该属的另外2种细菌,约氏黄杆菌(Flavobacterium.johnsoniae)和嗜冷黄杆菌(F.psychrophilum)都有与该胶原酶基因相似的基因,其相似性分别为92%和83%.该基因经KpnI和SalI酶切后连接到表达载体pET-32a上,转人大肠杆菌BL21(DE3)plysS内进行表达,经SDS-PAGE电泳后显示重组融合蛋白在44 kD处有明显表达带,与预期分子量大小一致,且主要以不溶的包涵体形式存在,变性条件下利用His·Bind树脂成功纯化了融合蛋白,将其免疫家兔,获得兔抗柱状黄杆菌胶原蛋白酶抗体,Western blotting表明该胶原酶在柱状黄杆菌的胞内和胞外都存在.这些结果为进一步研究这种胶原蛋白酶的功能及柱状黄杆菌的致病机理奠定了基础.

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来源
《中国水产科学》 |2009年第5期|786-790|共5页
作者
张立强; 谢海侠; 李楠; 聂品;
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作者单位

淡水生态与生物技术国家重点实验室,中国科学院水生生物研究所,湖北,武汉,430072;

中国科学院研究生院,北京,100039;

淡水生态与生物技术国家重点实验室,中国科学院水生生物研究所,湖北,武汉,430072;

淡水生态与生物技术国家重点实验室,中国科学院水生生物研究所,湖北,武汉,430072;

淡水生态与生物技术国家重点实验室,中国科学院水生生物研究所,湖北,武汉,430072;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类水产保护学;
关键词
柱状黄杆菌; 胶原蛋白酶; 克隆; 表达;

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