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首页> 中文期刊> 《中国水产科学》 >鲤IL-17N的基因克隆、表达及促炎作用

鲤IL-17N的基因克隆、表达及促炎作用

         
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白细胞介素17 （Interleukin-17, IL-17）在炎症和宿主防御中起重要作用。为了解鲤（Cyprinus carpio） IL-17N基因的功能,本研究使用同源搜索和基因克隆的方法在鲤基因组挖掘鉴定到两个IL-17N基因（CcIL-17Na和CcIL-17Nb）,均由TOP3B基因内含子2的互补序列编码。共线性比较显示,除了东方红鳍鲀（Takifugurubripes）外,在其他已研究的鱼类中,与该基因相邻的均为SDF2L和PPM1F基因。两个CcIL-17Ns都有3个外显子,编码136个氨基酸,两者相似性高达为97.1%,CcIL-17Na、CcIL-17Nb和其他硬骨鱼类的IL-17N相似性分别为65.3%～97.1%、64.7%～96.3%,和鲤IL-17家族其他成员的相似性分别为32.9%～51.4%、31.4%～50.7%。鱼类IL-17家族系统树显示7个成员形成6支,其中IL-17A/F1和IL-17A/F3组成一支,其余6个成员单独成支,鲤IL-17N先与鲤科鱼类以94%置信值聚在一起,然后与虹鳟（Oncorhynchus mykiss）、大西洋鲑（Salmo salar）、青鳉（Oryzias latipes）、东方红鳍鲀（Takifugurubripes）和尼罗罗非鱼（Oreochromisniloticus）等以85%的置信值聚在一起,再与雀鳝（Lepisosteus oculatus）和腔棘鱼（Coelacanth）的IL-17N以95%置信值聚为一支。实时定量PCR结果显示CcIL-17Ns在受精后0.5 h和12 h的表达量极显著高于受精后25 h、35 h、60 h、120 h及仔鱼阶段的表达量（P＜0.01）; CcIL-17Ns在鲤夏花和成鱼脑中的表达量均最高,显著（P＜0.05）或极显著（P＜0.01）高于其他组织。嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）感染导致CcIL-17Ns在各组织的表达均上调,感染6 h,脑中的表达量显著增加（P＜0.05）, 1 d, CcIL-17Ns在其他组织中均显著增加（P＜0.05）,感染3 d和7 d,表达量均下降至与对照组无显著差异（P＞0.05）。构建原核重组表达载体pMAL-c2X-17N,在大肠杆菌（Escherichiacoli）Transetta（DE3）中进行原核表达,使用镍柱纯化获得可溶的IL-17N重组蛋白（MBP-17N）。使用0.1 ng/mL、1 ng/mL、10 ng/mL和100 ng/mL的MBP-17N孵育鲤肾组织8 h,结果显示,不同浓度的MBP-17N均使IL-1β和NF-κB显著上调（P＜0.05）; 1 ng/mL和10 ng/mL的MBP-17N极显著上调IFN-γ（P＜0.01）; 0.1 ng/mL、1 ng/mL的MBP-17N显著上调IL-6, 1 ng/mL、10 ng/mL、100 ng/mL的MBP-17N显著上调CCL20（P＜0.05）;1ng/mL的MBP-17N使TRAF6的表达显著高于对照组（P＜0.05）。本研究通过分析鲤IL-17Ns的系统发育、测定该基因的时空表达特征,发现嗜水气单胞菌感染后各组织CcIL-17Ns表达上调、原核表达蛋白能引起炎症因子的表达,从而证实了鲤IL-17N参与炎症反应。

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