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球毛壳菌α-葡聚糖酶的异源表达、纯化及特性表征

         

摘要

利用毕赤酵母密码子偏好性优化合成球毛壳菌α-葡聚糖酶基因,并在毕赤酵母GS115中实现异源表达.通过高拷贝筛选和摇瓶发酵条件的单因素优化,重组α-葡聚糖酶的酶活力由初始的2.692 U/mL提高至47.915 U/mL.选择Hitrap Q HP和Hitrap SP HP的双步层析分离将发酵粗酶液纯化至电泳纯,纯化倍数40.83,比活达277.61 U/mg,回收率为24.15%.纯酶最适温度和pH分别为60°C和5.5.在20~50°C和pH为4.5~8.5范围内稳定性良好,浓度为10 mmol/L的Fe2+对酶有激活作用,Cu2+浓度(0.1~10 mmol/L)越高对酶的抑制作用越强.酶动力学实验发现该重组酶对高相对分子质量的底物亲和力更高,葡聚糖T2000为该酶的最适底物.

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