PKB/Akt调节结构域的克隆,表达及初步纯化

王立峰; 张健; 李莹; 苏金; 药立波; 刘新平

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PKB/Akt调节结构域的克隆,表达及初步纯化

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目的 :克隆akt1的调节结构域 (regulationdomainRD)的编码基因 ,表达并纯化AktRD蛋白 ,为研究RD的功能奠定基础 .方法 :用RT PCR方法从胚胎肝细胞中获得Akt1调节结构域RD的编码基因 ,克隆至pMD18 T载体并测序 ,结果正确后亚克隆到含有 6个His的融合表达载体pRSET A中 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3 ) ,经IPTG诱导表达RD/6×His融合蛋白 ,超声裂菌 ,将上清通过金属螯合层析进行纯化 .结果 :从人胚胎肝细胞中扩增出编码RD的cDNA ,序列测定证实与文献报道的序列一致 ;成功构建了 6×His融合的表达载体pRSET A RD ;表达了RD/6×His融合蛋白 ,并纯化得到了RD/6×His蛋白 .结论 :成功克隆了人akt1的调节结构域RD基因 ,构建了6×His融合的表达载体。

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来源
《空军军医大学学报》 |2003年第6期|481-484|共4页
作者
王立峰; 张健; 李莹; 苏金; 药立波; 刘新平;
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作者单位

第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类发生遗传学（发育遗传学）、生理遗传学;
关键词
PKB/Akt; 克隆; 分子; 基因表达; 纯化;

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