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草鱼呼肠孤病毒GCRV 096 VP7蛋白的表达及免疫原性

         

摘要

[目的]研究草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus,GCRV)096 vp7基因的原核和真核表达及其编码蛋白的免疫原性.[方法]应用RT-PCR技术获得GCRV 096 vp7基因,构建GCRV 096 vp7基因原核表达载体pET-VP7,用原核表达的GCRV 096 VP7蛋白免疫草鱼(Ctenopharyngodon idellus)15 d后,用GCRV 096和GCRV GD108分离株对其攻毒,检测GCRV 096 VP7的免疫原性.构建GCRV 096 vp7基因真核表达载体pEGFP-N3-VP7,分析其在草鱼CIK细胞中的表达.[结果与结论]GCRV 096 vp7基因的开放阅读框ORF(GenBank登录号为JN206665)为831 bp,编码276个氨基酸.成功构建GCRV 096 vp7基因原核表达载体pET-VP7,并在大肠杆菌BL21中诱导表达成功;最优表达条件是0.2 mm/L IPTG、28℃下表达5 h,通过HisTrap HP柱纯化融合蛋白,Western blot分析结果表明,所表达的蛋白为目的蛋白.经免疫及GCRV攻毒后,GCRV 096(Ⅰ型)免疫组vp7基因的表达水平降低(P<0.05),而GCRV GD108(Ⅱ型)免疫组vp7基因的表达无显著差异,表明GCRV 096 VP7蛋白对GCRV 096具有良好的免疫效果,但对GCRV GD108无明显的免疫效果.成功构建GCRV 096 vp7基因真核表达载体pEGFP-N3-VP7,Western blot分析结果表明,GCRV 096 VP7蛋白在草鱼肾(CIK)细胞中成功表达.

著录项

  • 来源
    《广东海洋大学学报》 |2020年第4期|1-6|共6页
  • 作者单位

    广东海洋大学水产学院 //广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室 //水产经济动物病害防控广东普通高校重点 实验室 广东 湛江 524088;

    广东海洋大学水产学院 //广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室 //水产经济动物病害防控广东普通高校重点 实验室 广东 湛江 524088;

    广东海洋大学水产学院 //广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室 //水产经济动物病害防控广东普通高校重点 实验室 广东 湛江 524088;

    广东海洋大学水产学院 //广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室 //水产经济动物病害防控广东普通高校重点 实验室 广东 湛江 524088;

    广东海洋大学水产学院 //广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室 //水产经济动物病害防控广东普通高校重点 实验室 广东 湛江 524088;

    广东海洋大学水产学院 //广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室 //水产经济动物病害防控广东普通高校重点 实验室 广东 湛江 524088;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 基因工程(遗传工程);鲤形目;
  • 关键词

    草鱼呼肠孤病毒; vp7基因; 表达; 免疫原性;

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