片形吸虫'中间型'组织蛋白酶L2基因的原核表达及鉴定

王晓旭; 曾敏浩; 吕庆博; 邱鸿宇; 常巧呈; 王春仁

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cqvip:组织蛋白酶L2(CathepsinL2,CatL2)存在于片形吸虫发育的各个时期,具有潜在的免疫保护性及诊断性。为了获得片形吸虫"中间型"("intermediate form"of Fasciola,Fsp)CatL2基因的重组蛋白,根据GenBank中公布的肝片形吸虫组织蛋白酶L2基因设计特异性引物,应用RT-PCR获得虫体的FspCatL2基因,经TA克隆后,进行测序及生物学分析;进一步构建原核表达重组质粒PET-28a(+)-FspCatL2,在大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行诱导表达,将纯化后的蛋白进行SDS-PAGE和Western Blot分析。结果表明扩增得到的FspCatL2基因的大小为933 bp,编码311个氨基酸,生物信息学显示FspCatL2有较多的α-螺旋,具有较好的抗原表位,推测该蛋白应有较好的抗原性。SDS-PAGE结果显示在35 kDa处有目的条带,Western Blot分析发现重组FspCatL2与片形吸虫"中间型"阳性血清发生反应,而与阴性血清不发生反应。实验成功克隆表达了片形吸虫"中间型"组织蛋白酶L2,为进一步研究其功能奠定了基础。

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来源
《黑龙江八一农垦大学学报》 |2019年第6期|29-34|共6页
作者
王晓旭; 曾敏浩; 吕庆博; 邱鸿宇; 常巧呈; 王春仁;
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作者单位

黑龙江八一农垦大学动物科技学院大庆 163319;

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正文语种 chi
中图分类 R383.24;
关键词
片形吸虫中间型; 组织蛋白酶L2; 表达分析;

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