传染性法氏囊病毒VP2蛋白的原核表达及其免疫效果评价

李甜甜; 蒋大伟; 姬鹏超; 王银铃; 张改平

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传染性法氏囊病毒VP2蛋白的原核表达及其免疫效果评价

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为提高原核表达传染性法氏囊病毒(IBDV)VP2蛋白纯度,在大肠杆菌中表达VP2蛋白,并对其进行纯化方法优化及其免疫原性分析.利用琼脂扩散试验(AGP)测定VP2蛋白效价并进行SDS-PAGE和Western blot鉴定;采用饱和硫酸铵溶液和离子交换层析对目的蛋白进行纯化,并对纯化填料、洗脱液离子强度及缓冲液的pH值进行优化,以确定最佳纯化条件.将纯化的VP2蛋白免疫SPF鸡,定期采血用ELISA方法测定其免疫抗体并进行病理组织检测.SDS-PAGE及West-ern blot鉴定结果显示,VP2分子质量约为50 ku,且具有良好反应原性,VP2蛋白可溶性表达的AGP效价为1:16.纯化结果显示,利用强阴离子层析优化盐离子浓度及pH值可获得纯度较高的VP2蛋白,其质量浓度为0.6 mg/mL.纯化的VP2蛋白加商业佐剂免疫鸡28 d后,鸡产生的特异性免疫抗体滴度最高,且攻毒后的保护率可达到80％,法氏囊无明显病理组织损伤.综上,利用大肠杆菌成功表达了VP2蛋白,纯化的VP2蛋白纯度较高且具有良好的免疫原性.

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来源
《河南农业科学》 |2020年第9期|136-142|共7页
作者
李甜甜; 蒋大伟; 姬鹏超; 王银铃; 张改平;
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作者单位

河南农业大学牧医工程学院河南郑州 450002;

河南省农业科学院动物免疫学重点实验室河南郑州 450002;

河南农业大学牧医工程学院河南郑州 450002;

河南农业大学牧医工程学院河南郑州 450002;

河南农业大学牧医工程学院河南郑州 450002;

河南农业大学牧医工程学院河南郑州 450002;

河南省农业科学院动物免疫学重点实验室河南郑州 450002;

江苏高校动物重要疾病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州 225009;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类病毒病;
关键词
传染性法氏囊病病毒; VP2蛋白; 大肠杆菌; 蛋白质纯化; 免疫原性;

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