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牛膝总皂苷对IL-1β诱导髓核细胞的凋亡及炎性损伤的影响

         

摘要

目的通过观察髓核细胞(nucleus pulposus cell,NPC)的凋亡、炎症及细胞外基质(extracellular matrix,ECM)代谢研究不同浓度牛膝总皂苷(achyranthes bidentata saponin,ABS)对白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)诱导人源NPC损伤的保护作用。方法通过IL-1β诱导建立NPC退变模型,随机将细胞分为正常组、模型组(10 ng/mL IL-1β)、ABS低剂量组(10 ng/mL IL-1β+3μg/mL ABS)、ABS中剂量组(10 ng/mL IL-1β+10μg/mL ABS)及ABS高剂量组(10 ng/mL IL-1β+30μg/mL ABS),干预24 h。CCK-8法检测细胞活力,采用Tunel法和流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(B-cell lymphoma-2-associated X protein,Bax)、天冬氨酸蛋白水解酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Caspase-3)、B细胞淋巴瘤-xl(B-cell lymphoma-xl,Bcl-xl)、环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)、基质金属蛋白酶-3(matrix metalloproteinase-3,MMP-3)和血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶-5(recombinant a disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin-5,ADAMTS-5)蛋白表达情况。结果与正常组比较,模型组NPC活力显著下降(P<0.01),凋亡率增加(P<0.01),Bax、Caspase-3、COX-2、MMP-3和ADAMTS-5蛋白表达升高(P<0.05),Bcl-xl蛋白表达降低(P<0.05);与模型组比较,不同浓度的ABS处理后,NPC活力显著上升(P<0.05),凋亡率减少(P<0.05),Bax、Caspase-3、COX-2、MMP-3和ADAMTS-5蛋白表达降低(P<0.05),Bcl-xl蛋白表达升高(P<0.05)。结论ABS可以通过抑制由IL-1β诱导引起的NPC凋亡、炎症反应、ECM降解,促进细胞增殖和活性,对NPC产生保护作用,其机制可能与抑制Bax、Caspase-3、ADAMTS-5、MMP-3及COX-2表达,促进Bcl-xl表达相关。

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