超表达状态下的TMP21对介导阿尔茨海默氏病γ分泌酶复合物活性影响的研究

董贵成; 王迎春; 阿拉坦高勒; 王静; 门中华; 赵俊利; 博.格日勒图

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研究转运膜蛋白21(TMP21)在小鼠成纤维细胞中超表达状态下,对γ分泌酶活性的影响.利用TMP21 cDNA转染敲除淀粉样前体蛋白表达基因的小鼠胚胎成纤维细胞系(MEF(KO)),以梯度浓度G418筛选TMP21表达量最高的细胞.处理超表达组(T)和对照组(C)细胞,并收集纯化含γ分泌酶复合物的样本.用Western blotting检测TMP21蛋白表达量,选用饱和浓度的γ分泌酶底物C99,运用ELISA检测A-βpeptide40和A-βpeptide42的生成总量.结果表明,样本T1、T2及IPT2所含TMP21的蛋白表达量较相应对照组样本C1、C2和IPC2分别上升11.5%(P=0.08),28.1%(P<0.01),69.1%(P<0.001),提示经TMP21 cDNA转染后MEF(KO)细胞中TMP21蛋白表达明显提高.同时,对照样本C1、C2及IPC2,样本T1、T2及IPT2中所含γ分泌酶活性分别降低33.4%(P=0.01),71.9%(P<0.001),96.5%(P<0.001).转染组样本中,样本IPT2所含γ分泌酶活性最低,提示经处理γ分泌酶得到明显纯化分离,与Western blotting所得结果一致.因此,高表达状态下的TMP21蛋白,对MEF(KO)细胞中γ分泌酶的活性具有明显的降低作用,表明TMP21为γ分泌酶的负调控因子之一.

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来源
《内蒙古师范大学学报：自然科学版》 |2009年第2期|203-208|共6页
作者
董贵成; 王迎春; 阿拉坦高勒; 王静; 门中华; 赵俊利; 博.格日勒图;
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作者单位

内蒙古大学生命科学学院;

内蒙古科技大学包头师范学院;

内蒙古农业大学动物科学与医学学院;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类酶;
关键词
脱氧核糖核酸超表达; 转运膜蛋白21; γ分泌酶活性; 酶联免疫反应; 免疫印迹反应;

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