转录因子GATA结合蛋白3对哮喘易感基因ADAM33表达的影响

芮菲菲; 杜娟; 郝忠分; 马世奇; 王雯; 束进

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目的:探讨转录因子GATA结合蛋白3(GATA binding protein 3,GATA3)对解整合素金属蛋白酶33(a disintegrin and metalloproteinase 33,ADAM33)基因启动子活性及mRNA表达的影响。方法:以人正常肺上皮BEAS-2B细胞DNA为模板经PCR扩增得到ADAM33基因启动子区1953 bp片段。通过双酶切、连接、转化等步骤将该片段克隆至pGL3-Basic载体构建ADAM33启动子重组质粒,并将其转染至人HEK293T、BEAS-2B细胞中;利用双荧光素酶报告基因技术检测HEK293T、BEAS-2B细胞中所构建的质粒启动子活性。将HEK293T、BEAS-2B细胞分为pcDNA-GATA3组和pcDNA3.1对照组,分别转染GATA3过表达质粒和空白对照质粒,用双荧光素酶报告基因技术检测荧光素酶活性;用实时荧光定量PCR检测BEAS-2B细胞中ADAM33 mRNA相对表达水平。结果:通过PCR、双酶切和测序鉴定,成功构建含ADAM33启动子片段的重组质粒;重组质粒的ADAM33启动子活性较pGL3-Basic对照组明显增高。与pcDNA3.1组相比,HEK293T、BEAS-2B细胞中pcDNA-GATA3组ADAM33启动子区荧光素酶活性明显增高(P<0.05或P<0.01);BEAS-2B细胞中pcDNA-GATA3组ADAM33 mRNA相对表达水平明显增高(P<0.01)。结论:转录因子GATA3上调哮喘易感基因ADAM33启动子活性及mRNA表达。

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来源
《江苏大学学报：医学版》 |2022年第2期|131-135|共5页
作者
芮菲菲; 杜娟; 郝忠分; 马世奇; 王雯; 束进;
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作者单位

江苏大学第四附属医院儿科;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类 R394.3;R562.25;
关键词
启动子活性; GATA结合蛋白3; 解整合素金属蛋白酶33; 哮喘; BEAS-2B细胞;

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