70mer长寡核苷酸探针芯片制备、标记方法及杂交条件的优化

庞靖祥; 韩金祥; 高雪芹; 潘继红

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70mer长寡核苷酸探针芯片制备、标记方法及杂交条件的优化

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目的优化长片段寡核苷酸芯片制备、探针标记及杂交条件。方法通过直接标记方法优化芯片的点样浓度、点样后的固定方法。探索两种靶基因标记方法,并优化杂交液及各种杂交条件。结果采用70mer寡核苷酸探针,点样浓度在10μmol/L时就可获得满意的荧光强度。探针点样后37℃水合,然后在3600mJ条件下进行紫外交联固定效果最好。样品采用生物素间接标记较CY3直接标记信号强度强,成本相对低廉。优化出的杂交液成分:50%甲酰胺、5×SSC、0.5%SDS,杂交时间为8h,杂交温度为65℃。结论通过此试验优化了制备病原体长探针寡核苷酸芯片的制备方法,样品标记策略和杂交液及杂交温度,为下一步制备多种病原体的寡核苷酸芯片检测系统奠定了基础。

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来源
《医学分子生物学杂志》 |2008年第1期|11-15|共5页
作者
庞靖祥; 韩金祥; 高雪芹; 潘继红;
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作者单位

山东省医药生物技术研究中心卫生部生物技术药物重点实验室;

山东省现代医用药物与技术重点实验室;

济南市250062;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类生物工程学（生物技术）;
关键词
寡核苷酸探针; 基因芯片; 条件优化;

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