目的构建N-TIMP3重组腺病毒载体,为深入研究组织金属蛋白酶抑制因子-3(tissue inhibitor of metalloproteinases-3,TIMP-3)N端结构域对胰腺癌的作用奠定基础。方法PCR扩增编码人TIMP3信号肽及其N端结构域的DNA序列,定向克隆至空载穿梭质粒pShuttle-CMV,构建重组穿梭质粒pShuttle-N-TIMP3,并测序鉴定。将重组pShuttle-N-TIMP3转化BJ5183感受态细菌,与其内的腺病毒骨架质粒pAdEasy-1进行同源重组,构建重组腺病毒载体pAd-N-TIMP3,并经酶切与PCR鉴定。将线性化的重组载体转染QBI-293A细胞包装病毒,TCID50法检测病毒滴度,用Western印迹检测目的蛋白的表达。结果重组腺病毒载体pAd-N-TIMP3经鉴定正确,病毒滴度为5×108PFU/ml,并检测到目的蛋白的表达。结论成功构建了重组腺病毒载体pAd-N-TIMP3。
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