Ⅱ型志贺毒素单克隆抗体可变区基因克隆及单链抗体的表达和功能鉴定

郭喜玲; 吴涛; 曾晓燕; 张晓; 陈银; 史智扬; 詹峰; 金秋; 焦永军

首页> 中文期刊> 《医学分子生物学杂志》 >Ⅱ型志贺毒素单克隆抗体可变区基因克隆及单链抗体的表达和功能鉴定

Ⅱ型志贺毒素单克隆抗体可变区基因克隆及单链抗体的表达和功能鉴定

开具论文收录证明 >>

文献代查 >>

页面导航

摘要
著录项
相似文献
相关主题

摘要

目的从分泌抗肠出血性大肠埃希菌Ⅱ型志贺毒素中和单克隆抗体杂交瘤细胞株S2C4中克隆抗体可变区基因,构建单链抗体(ScFv),进行原核表达,并对其功能进行鉴定.方法从杂交瘤细胞株S2C4中提取总RNA,逆转录成cDNA.在cDNA3'-OH末端添加poly-G.PCR扩增包括5'非翻译区和信号肽序列在内的抗体重、轻链可变区基因VH和VL,PCR产物装入T-A载体测序.根据测序结果,设计引物分别扩增VH和VL编码区,再通过重叠PCR,在VH和VL编码区基因之间引入连接链,构建ScFv基因,并克隆到表达载体pComb3xSS中.重组载体导入E.coli Top10F'进行表达,重组蛋白经纯化后,分别用ELISA和动物保护性实验鉴定其生物学活性.结果 VH和VL编码区基因全长分别为396 bp和378 bp,ScFv基因能在大肠埃希菌中高效表达,表达产物的分子量为34 000,用NiSO4亲和层析柱成功纯化.功能性实验表明纯化的重组蛋白可以与Stx2毒素有效结合,能保护动物抵御毒素分子的攻击.结论成功地克隆S2C4单抗可变区基因,并构建、表达其单链抗体ScFv,为下一步进行该抗体人源化奠定实验基础.

著录项

来源
《医学分子生物学杂志》 |2010年第5期|382-387|共6页
作者
郭喜玲; 吴涛; 曾晓燕; 张晓; 陈银; 史智扬; 詹峰; 金秋; 焦永军;
展开▼
作者单位

卫生部肠道病原微生物重点实验室,江苏省疾病预防控制中心病原微生物研究所,南京市,210009;

卫生部肠道病原微生物重点实验室,江苏省疾病预防控制中心病原微生物研究所,南京市,210009;

卫生部肠道病原微生物重点实验室,江苏省疾病预防控制中心病原微生物研究所,南京市,210009;

南京医科大学卫生部抗体技术重点实验室,南京市,210029;

卫生部肠道病原微生物重点实验室,江苏省疾病预防控制中心病原微生物研究所,南京市,210009;

卫生部肠道病原微生物重点实验室,江苏省疾病预防控制中心病原微生物研究所,南京市,210009;

南京医科大学卫生部抗体技术重点实验室,南京市,210029;

南京医科大学卫生部抗体技术重点实验室,南京市,210029;

卫生部肠道病原微生物重点实验室,江苏省疾病预防控制中心病原微生物研究所,南京市,210009;

展开▼
原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类 R392.116;
关键词
Ⅱ型志贺毒素; 单克隆抗体; 单链抗体; 表达; 功能鉴定;

相似文献

中文文献
外文文献
专利

1. 抗血小板膜糖蛋白单克隆抗体SZ-21基因克隆及单链抗体的构建和表达 [J] . 安广宇 ,董宁征 ,阮长耿 . 免疫学杂志 . 2001,第3期
2. 单克隆抗体3D3轻重链可变区基因克隆及其在E.coli中表达 [J] . 史依仁 ,郭先健 . 第三军医大学学报 . 1998,第1期
3. 抗人RBC A抗原50A株单抗可变区基因克隆及单链抗体基因构建 [J] . 王长军 ,唐家琪 ,潘秀珍 . 中国输血杂志 . 1999,第2期
4. 抗A型产气荚膜梭菌α毒素单链抗体1A8的基因克隆及序列测定 [J] . 赵宝华 ,许崇波 ,朱平 . 中国预防兽医学报 . 2000,第001期
5. 抗A型产气荚膜梭菌α毒素单链抗体的基因克隆及核苷酸序列分析 [J] . 许崇波 ,赵宝华 ,马从林 . 中国兽医学报 . 2000,第3期
6. 人源抗破伤风毒素单链抗体(scfv)的原核表达、纯化及功能鉴定 [C] . 熊颖 ,李晓进 ,乔玉玲 . 第十次全国生物制品学术会议 . 2009
7. 肠出血性大肠杆菌志贺毒素Ⅰ型A亚单位(Stx1A)的表达及其单克隆抗体的制备 [A] . 黄明明 . 2014

Ⅱ型志贺毒素单克隆抗体可变区基因克隆及单链抗体的表达和功能鉴定

摘要

著录项

相似文献

相关主题

期刊订阅