北野豌豆及其近缘种ISSR反应条件的优化

韩颖

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北野豌豆及其近缘种ISSR反应条件的优化

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采用改进的CTAB法,成功地提取了北野豌豆及其近缘种的基因组DNA,电泳结果显示DNA质量和产量均较高,并以此DNA为模板,对ISSR的反应条件进行了优化,最终确定ISSR的反应体系为:总体积10μl,包括10ng的DNA,1倍的反应缓冲液,1.5mmol·L-1MgCl2,2×10-4mmol·L-1(引物6和引物8)或2×10-3mmol·L-1(引物5,10和12)引物,0.2mmol·L-1dNTP混合物和1.0U的Taq DNA聚合酶.ISSR扩增程序为:先在94℃下变性3min,然后在92℃下变性30s,50℃(引物5,6,10,12)或55.2℃(引物8)下复性30s,72℃下延伸1min,反应30个循环,最后72℃延伸5min.并基于此反应条件,最终筛选出5条ISSR引物用于进一步的研究.

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来源
《内江师范学院学报》 |2008年第2期|51-54|共4页
作者
韩颖;
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作者单位

西南科技大学,生命科学与工程学院,四川,绵阳,621010;

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正文语种 chi
中图分类植物分类学（系统植物学）;
关键词
北野豌豆; 简单序列重复问题; 反应体系;

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