大鼠FcγRIIb基因慢病毒的制备及其在BMDC细胞中的表达检测

张武; 丁洋; 李立强; 李明皓

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目的构建大鼠FcγRIIb慢病毒诱导表达载体,表达病毒与调节病毒共同感染大鼠骨髓来源树突状细胞(BMDCs)并检测FcγRIIb的表达.方法提取大鼠肝脏mRNA,并以其为模板通过逆转录及PCR获得FcγRIIb基因片段,利用酶切重连技术构建慢病毒表达载体TRE与FcγRIIb重组慢病毒载体.使用HEK293T细胞分别包装TRE-FcγRIIb表达病毒与TET-on调节病毒,并检测其病毒滴度;离体诱导培养大鼠骨髓来源未成熟树突状细胞并鉴定.采用OX-62免疫磁珠分选大鼠骨髓来源未成熟树突状细胞(iDC),用表达病毒和可诱导病毒共感染iDC.经一定梯度的强力霉素(DOX)诱导,分别用实时荧光定量PCR和蛋白免疫印记法(WB)检测BMDC中FcγRIIb mRNA水平及FcγRIIb蛋白表达水平;免疫荧光检测树突状细胞中FcγRIIb的表达;电镜对分离培养的BMDC进行形态学观察和鉴定.结果成功构建TRE-FcγRIIb重组慢病毒载体,经酶切、PCR电泳条带鉴定成功,基因序列测定结果与GenBank比对同源性100％.体外诱导培养BMDC,5d左右观察到明显的树突样凸起.成功用慢病毒感染BMDC后,FcγRIIb mRNA和FcγRIIb蛋白水平均较未感染BMDC有明显的增高.结论成功制备了含大鼠FcγRIIb基因慢病毒,用其感染未成熟树突状细胞并经DOX诱导可实现FcγRIIb的高表达.

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来源
《宁夏医科大学学报》 |2019年第2期|138-142151|共6页
作者
张武; 丁洋; 李立强; 李明皓;
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作者单位

宁夏医科大学;

银川 750004;

宁夏回族自治区人民医院肝胆外科;

银川 750002;

宁夏医科大学;

银川 750004;

宁夏回族自治区人民医院肝胆外科;

银川 750002;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类免疫病理学;
关键词
FcγRIIb; 慢病毒表达载体和可诱导载体; 诱导表达;

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