一种高效的苹果褪绿叶斑病毒TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR检测方法

秦子禹; 孙建设; 王娜; 邵建柱

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为建立一种检测苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorotic leaf spot virus,ACLSV)的Taq Man探针实时荧光定量RT-PCR方法,根据ACLSV外壳蛋白基因(coat protein,cp)保守序列设计了特异性引物和Taq Man探针,以构建的ACLSV-cp重组质粒为阳性标准品绘制标准曲线,并对该方法的特异性、灵敏性、重复性进行检验。结果显示,以ACLSV-cp重组质粒为标准品建立的标准曲线相关系数达0.999,扩增效率为103.7%;建立的Taq Man探针实时荧光定量RT-PCR方法特异性好,与苹果茎沟病毒(Apple stem grooving virus,ASGV)、苹果茎痘病毒(Apple stem pitting virus,ASPV)、苹果锈果类病毒(Apple scar skin viroid,ASSVd)均无交叉反应;灵敏度为100拷贝/μL,比常规RT-PCR高100倍;批内和批间变异系数均小于0.84%。表明Taq Man探针实时荧光定量RT-PCR方法具有特异性强、灵敏性高、重复性好的优点,适用于实际样品中ACLSV的快速准确检测。

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来源
《植物保护学报》 |2015年第4期|551-556|共6页
作者
秦子禹; 孙建设; 王娜; 邵建柱;
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作者单位

河北农业大学园艺学院;

保定071001;

河北科技师范学院园艺科技学院;

昌黎066600;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类 S432.41;
关键词
苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV); TaqMan探针; 实时荧光定量RT-PCR;

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