牙齿发育相关基因adam28多克隆抗体的制备及鉴定

赵征; 文玲英; 金岩; 杨曦; 轩东英

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牙齿发育相关基因adam28多克隆抗体的制备及鉴定

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目的:制备及鉴定抗ADAM28的多克隆抗体.方法:采用反转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)扩增出adam28基因的蛋白编码区序列,克隆到中间载体pMD18-T Vector中,再经双酶切得到adam28片段定向克隆到pGEX-4T-1载体中,构建融合表达载体pGEX-4T-adam28,在大肠杆菌中用IPTG进行诱导表达,得到GST-ADAM28融合蛋白,经过初步纯化及SDS-PAGE电泳,在35 300的新蛋白带处直接割胶,作为抗原免疫新西兰大白兔后获取抗体.结果:成功构建融合表达载体pGEX-4T-adam28,得到初步纯化的GST-ADAM28融合蛋白,免疫兔子1 个月后,获得免疫血清,盐析法纯化得到多克隆抗体.Western印迹结果显示所得到的抗体具有较高的特异性,ELISA分析证实其效价可达1:16 000.结论:成功制备出高效价的抗ADAM28多克隆抗体,为进一步研究ADAM28在牙齿发育中的作用和表达分布奠定基础.

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来源
《实用口腔医学杂志》 |2006年第2期|166-170|共5页
作者
赵征; 文玲英; 金岩; 杨曦; 轩东英;
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作者单位

西安第四军医大学口腔医学院儿童口腔科,710032;

西安第四军医大学口腔医学院儿童口腔科,710032;

西安第四军医大学组织工程研发中心;

西安第四军医大学医学遗传学与发育生物学教研室;

西安第四军医大学组织工程研发中心;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类口腔科学;
关键词
adam28基因; 融合蛋白; 多克隆抗体; 免疫印迹;

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