三疣梭子蟹PtCrustin3成熟肽在毕赤酵母中的重组DNA表达

卢希阳; 陶妍

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三疣梭子蟹PtCrustin3成熟肽在毕赤酵母中的重组DNA表达

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Crustin抗菌肽是一类由甲壳动物表达的具有抗菌作用的小分子肽,它们在动物抵御病原微生物侵染的免疫系统中发挥了重要作用,被认为是替代抗生素的良好候选者。Crustin的N端含有一个信号序列,与之相连接的C端为成熟肽序列,内含一个WAP(Whey acidic protein)结构域,为Crustin的活性区域;根据信号肽与WAP结构域之间的结构差异,可以将Crustin分为三种类型。本文以三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)I型Crustin的一个同工型"Pt Crustin3"的成熟肽(mPtCrustin3)为研究对象,通过RT-PCR从鳃中克隆到编码mPtCrustin3的cDNA,并通过巢式PCR对其添加EcoRⅠ和XbaⅠ酶切位点以及6×His标签。以pPICZaA为真核表达载体,成功构建了重组表达载体pPICZaA-mPtCrustin3,电转入毕赤酵母X-33,在29℃、250 r/m的条件下,经1.0%甲醇诱导表达96 h后,获得的表达产物经Tricine-SDS-PAGE分析,证明分子量约为11.6 k D的重组体mPtCrustin3在毕赤酵母X-33中被成功表达。

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来源
《山东农业大学学报：自然科学版》 |2017年第2期|303-309|共7页
作者
卢希阳; 陶妍;
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作者单位

上海海洋大学食品学院;

上海水产品加工及贮藏工程技术研究中心;

上海201306;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类多肽族抗菌素;
关键词
三疣梭子蟹; RT-PCR; PtCrustin3成熟肽; 毕赤酵母; 重组表达;

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