噬菌体展示技术构建重组人TNF-α单链抗体库

柴蔚然; 杨涛; 胡晓年; 牛勃

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噬菌体展示技术构建重组人TNF-α单链抗体库

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目的应用噬菌体展示技术构建抗重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α)的单链抗体库。方法利用噬菌体表面展示技术、绕过杂交瘤技术,提取经免疫BALB/c小鼠淋巴细胞总RNA,用相应引物扩增小鼠免疫球蛋白VH基因和VL基因,构建VH、VL抗体库。由L inker-prim erm ix经重叠延伸反应将重链可变区基因与轻链可变区基因拼接成单链抗体。再用RS prim erm ix以单链抗体为模板进行第二次聚合酶链反应,从而获得全套抗rhTNF-α的单链抗体基因。以SfiⅠ/NotⅠ,位点定向插入pCANTAB-5E噬菌粒载体,转化大肠杆菌TG1后,经M13KO7辅助噬菌体拯救,构建成全套抗rhTNF-α单链抗体表面展示文库。结果成功构建了rhTNF-α全套单链抗体噬菌体表面展示文库。经M13KO7超感染后,噬斑计数滴度为2.1×1011pfu。结论rhTNF-α全套单链抗体噬菌体表面展示文库的构建,为研究rhTNF-α抗体结合位点,了解其结构与功能的关系以及研究用于临床免疫治疗的新型抗体打下了基础。

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来源
《上海交通大学学报：医学版》 |2006年第2期|155-158|共4页
作者
柴蔚然; 杨涛; 胡晓年; 牛勃;
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作者单位

上海交通大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室;

山西医科大学生物化学与分子生物学教研室;

中国协和医科大学基础研究所;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类基因工程（遗传工程）;
关键词
肿瘤坏死因子-α; 单链抗体; 噬菌体展示技术; 重组人TNF-α单链抗体库;

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