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首页> 中文期刊> 《山西医科大学学报》 >miR-210靶向CDK7参与骨关节炎保护的作用机制

miR-210靶向CDK7参与骨关节炎保护的作用机制

         
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目的 探讨骨关节炎(OA)发生过程中微小RNA-210(microRNA,miR-210)及细胞周期蛋白依赖性激酶7(CDK7)的调控作用.方法 SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、AgomiR-210组(注射miR-210激动剂,2 nmol/只)、AgomiR-210 NC组(注射miR-210阴性对照试剂,2 nmol/只),每组10只.采用膝关节内侧韧带离断与半月板切除术建立OA模型,术后1周经关节腔注射相应药物8周.观察大鼠软骨大体形态;苏木精-伊红染色(HE)观察软骨组织学形态并进行Mankin's评分;蛋白免疫印迹法(Western blot)测软骨组织中CDK7、核因子-κB活性因子p65(NF-κB p65)及磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-α)表达水平;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测软骨组织中miR-210表达.双荧光素酶报告试验验证miR-21与CDK7的靶向关系.取人SW1353软骨细胞系,设置为:正常组、OA模型组(10 ng/ml IL-1β诱导建立OA模型)、miR-210 mimic组(转染miR-210过表达试剂)、miR-210 mimic NC组(转染miR-210过表达阴性对照试剂)、miR-210 mimic+pcDNA-CDK7(转染miR-210过表达试剂及CDK7过表达序列)、miR-210 mimic+pcDNA组(转染miR-210过表达试剂+CDK7过表达阴性对照序列);RT-qPCR及Western blot检测miR-210及CDK7、p-NF-κB p65/NF-κB p65、IL-6、TNF-α 蛋白表达.结果 与正常对照组相比,模型组及AgomiR-210 NC组大鼠关节面糜烂、软骨缺损等病理损伤严重;AgomiR-210组大鼠关节及软骨病变缓解.与正常对照组相比,模型组及AgomiR-210 NC组大鼠Mankin's评分、CDK7、p-NF-κB p65/NF-κB p65、IL-6、TNF-α蛋白表达升高(P<0.05),miR-210表达降低(P<0.05).AgomiR-210组大鼠上述指标变化趋势与模型组及AgomiR-210 NC组相反(P<0.05).双荧光素酶报告试验结果显示,与miR-210 NC+CDK7-3'UTR-WT组比较,miR-210 mimics+CDK7-3'UTR-WT组荧光素酶活性降低(P<0.05).miR-210 mimic与pcDNA-CDK7共转染,可削弱miR-210 mimic下调CDK7-NF-κB p65通路表达及缓解软骨细胞炎性反应的作用(P<0.05).结论 miR-210可能通过靶向抑制CDK7表达,抑制NF-κB通路活化,进而缓解OA炎症损伤及软骨病变.

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