结核分枝杆菌基因Rv2660c、Rv2460c、Rv3875、Rv3804c细胞表位融合蛋白的表达及其免疫原性评价

周玉真; 刘思静; 唐明圆; 蒋宫羽; 汪川

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目的评价结核分枝杆菌基因Rv2660c、Rv2460c、Rv3875和Rv3804c的细胞表位融合蛋白的免疫原性,为研制新型多阶段结核疫苗提供可靠的靶抗原。方法将Rv2660c、Rv2460c、Rv3875和Rv3804c基因中的细胞表位串联构成融合抗原基因(命名为msv),克隆到原核表达载体pEASY-Blunt E1中,诱导表达后采用亲和层析纯化表达产物,经SDS-PAGE和Western blot鉴定后,用纯化的融合抗原蛋白免疫小鼠,ELISA法检测免疫小鼠的特异性抗体滴度;分离免疫小鼠的脾淋巴细胞,采用淋巴细胞增殖法检测其免疫原性。结果成功构建了能表达融合抗原基因msv的原核表达质粒;SDS-PAGE和Western blot结果表明,表达产物亲和层析纯化后,获得相对分子质量为41.3×10^3的目的蛋白;ELISA检测免疫小鼠血清抗体滴度,结果表明特异性抗体效价约为1∶81 920;淋巴细胞增殖实验结果表明,抗原致敏的淋巴细胞经融合蛋白msv刺激后明显增殖。结论成功表达并纯化出融合蛋白msv,该融合蛋白可诱导小鼠特异性抗体表达和刺激细胞免疫应答,可作为结核疫苗的抗原组分。

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来源
《四川大学学报：医学版》 |2019年第4期|506-511|共6页
作者
周玉真; 刘思静; 唐明圆; 蒋宫羽; 汪川;
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作者单位

四川大学华西公共卫生学院卫生检验与检疫系;

成都610041;

四川大学华西公共卫生学院公共卫生与预防医学实验中心;

成都610041;

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正文语种 chi
中图分类医学免疫学;
关键词
结核分枝杆菌; 多阶段; Rv2660c; Rv2460c; Rv3875; Rv3804c; 细胞表位;

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