葎草花粉主要变应原Hum s1的表达、纯化与结构预测

刘昀; 孙秀珍; 徐晶; 吴媛媛

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目的克隆、表达、纯化葎草花粉主要变应原Hum s1,预测、分析其蛋白结构及功能,为评估该重组变应原的诊断及治疗效果奠定基础。方法采用PCR扩增目的基因Hum s1,并将Hum s1通过KpnⅠ/XhoⅠ位点克隆到pET32a表达载体,转化到克隆菌株E.coli DH5α,用PCR验证重组载体,并将表达载体转化至表达菌株E.coli BL-21,IPTG诱导表达目标基因,利用快速蛋白液相色谱技术纯化融合蛋白,并对表达蛋白的结构与功能进行预测分析。结果成功构建原核表达质粒pET32a-G2,并表达纯化葎草花粉主要变应原Hum s1,纯度达90%以上。分析其结构含有3个潜在的抗原表位,2个EF-手型结构域,成功构建其三维模型。ELESA试验证明重组蛋白能与葎草花粉过敏患者血清结合,具有免疫学活性。结论成功构建了葎草花粉变应原Hum s1的原核表达载体,表达并纯化了重组蛋白,并通过生物信息学方法获得了目的蛋白的抗原表位和三维结构模型,为进一步开展重组疫苗研究奠定了基础。

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来源
《四川大学学报：医学版》 |2016年第1期|14-18|共5页
作者
刘昀; 孙秀珍; 徐晶; 吴媛媛;
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作者单位

西安交通大学第二附属医院呼吸科;

西安710004;

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正文语种 chi
中图分类植物基因工程;
关键词
葎草花粉; 重组变应原; 基因克隆;

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