日本对虾IKKβ基因克隆及其表达分析

范嗣刚; 孙珍珠; 郭靖; 吴昊; 邓维德; 李翔; 黎源; 陈燕飞; 文菁

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日本对虾IKKβ基因克隆及其表达分析

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【目的】明确日本对虾NF-κB抑制蛋白激酶β基因(PjIKKβ)生物学特征及其在各组织和哈维弧菌刺激下的表达模式,为揭示IKKβ在日本对虾先天免疫中的作用机制提供理论依据。【方法】克隆PjIKKβ基因cDNA序列,通过ORF Finder、ExPASy ProtParam、SMART、SignalP 5.0、TMHMM、Prot-Comp等在线软件进行生物信息学分析,并以实时荧光定量PCR检测PjIKKβ基因在日本对虾各组织及哈维弧菌悬液刺激后的表达模式。【结果】PjIKKβ基因序列全长2794 bp,其开放阅读框(ORF)长2373 bp,共编码790个氨基酸残基。PjIKKβ蛋白包含1个丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶催化结构域(S-TKc)、1个亮氨酸锌指结构域(LZ)和1个螺旋—环—螺旋结构域(HLH),定位于细胞质和细胞核中,无跨膜结构,无信号肽。PjIKKβ与凡纳滨对虾IKKβ氨基酸序列相似性最高(98%),其次是与斑节对虾IKKβ氨基酸序列(97%);多序列比对分析结果显示,各物种IKKβ蛋白序列在S-TKc结构域的保守性较高,而在其他区域的保守性低。基于IKKβ氨基酸序列相似性构建的系统发育进化树显示,在甲壳动物分支中日本对虾先与凡纳滨对虾聚在一起,再与斑节对虾聚为一个分支。PjIKKβ基因在日本对虾肝胰腺、肌肉、鳃、神经节、胃、心脏、血淋巴和眼柄等8个组织中均有表达,以神经节、肌肉、血淋巴和眼柄中的相对表达量较高,显著高于在其他组织中的相对表达量(P<0.05);注射后24、48和72 h,PjIKKβ基因在注射哈维弧菌日本对虾血淋巴中的相对表达量上调,且与注射PBS日本对虾的相对表达量存在极显著差异(P<0.01)。【结论】PjIKKβ蛋白含有1个S-TKc结构域、1个LZ结构域和1个HLH结构域,在进化过程中非常保守;PjIKKβ基因的组织表达特征及其在哈维弧菌刺激后的表达变化,进一步证实PjIKKβ基因参与了日本对虾的先天免疫应答反应。

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来源
《南方农业学报》|2023年第6期|1837-1846|共10页
作者
范嗣刚; 孙珍珠; 郭靖; 吴昊; 邓维德; 李翔; 黎源; 陈燕飞; 文菁;
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作者单位

岭南师范学院/广东省粤西海鲜资源可持续利用工程技术研究中心;

中国水产科学研究院南海水产研究所;

韶关学院生物与农业学院;

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正文语种 chi
中图分类 S945.45;
关键词
日本对虾; IKKβ基因; 哈维弧菌; 表达特征; 先天免疫;

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