【目的】建立LAMP法快速鉴定水牛早期胚胎性别体系,为预知性别水牛胚胎移植奠定基础。【方法】分别采用化学裂解法和非化学裂解法提取水牛早期胚胎DNA,对比不同方法对G3PDH基因扩增效果的影响;基于水牛SRY基因和12S r RNA基因分别设计雄性特异性引物及雌、雄性共用引物用于LAMP法胚胎性别鉴定,同时以PCR对LAMP法鉴定结果进行验证。【结果】化学裂解法对水牛早期胚胎DNA具有良好的裂解效果,其有效检出率为94.1%。优化的LAMP法对水牛早期胚胎性别鉴定的准确率与检出率均为100.0%,检测灵敏度为2×10-5 ng。LAMP扩增产物中加入1%SYBR green I,于紫外光下观察,阳性呈绿色,阴性呈淡黄色;自然光下观察,阳性呈黄色,阴性呈橙色。以LAMP法对37枚水牛IVF早期胚胎性别进行鉴定,其中雄性为28枚,雌性为9枚。PCR验证结果与LAMP法鉴定结果一致。【结论】用化学裂解法提取水牛早期胚胎DNA,再根据水牛SRY基因及12S r RNA基因设计引物进行LAMP法水牛胚胎性别鉴定切实可行。
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