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PCR介导嗜肺军团菌疫苗候选基因lvgA和Hsp60的融合及其在大肠杆菌中表达的初步研究

         

摘要

目的采用PCR法进行嗜肺军团菌lvgA和Hsp60二基因的拼接融合,克隆并检测该融合基因在原核系统中表达情况,为进一步研究其免疫性能作必要的准备.方法采用重组聚合酶链反应,设计引物首先分别从嗜肺军团菌基因组DNA中扩得待融合端互补的军团菌毒力基因(lvgA)和热休克蛋白60基因(Hsp60),经琼脂糖电泳纯化回收,再以适量lvgA和Hsp60为模板变性、退火、重叠延伸,实现二基因的PCR水平融合,随后采用外引物进行新一轮扩增,扩得足量lvgA/Hsp60融合基因的PCR产物,继而将其定向克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,构建原核表达重组质粒,转化宿主菌BL21,经PCR、酶切及测序鉴定后,IPTG诱导表达,产物进行SDS-PAGE电泳、免疫印迹分析等鉴定.结果扩增出了约2292bp的lvgA/Hsp60融合基因,构建了原核表达重组质粒pGlvgA/Hsp60,并检测到Mr约117000的GST-lvgA-Hsp60融合蛋白表达条带.结论采用PCR法实现了嗜肺军团菌lvgA和Hsp60二基因的融合,构建了其原核表达重组质粒,并使该融合蛋白在原核系统中得到了有效的表达,为进一步研究该融合基因的免疫学特性奠定了基础.

著录项

  • 来源
    《南方医科大学学报》 |2006年第7期|904-909|共6页
  • 作者单位

    四川大学华西医学中心基础医学与法医学院寄生虫学教研室,四川,成都,610041;

    四川大学华西医学中心基础医学与法医学院寄生虫学教研室,四川,成都,610041;

    四川大学华西医学中心基础医学与法医学院寄生虫学教研室,四川,成都,610041;

    川北医学院附属医院检验科,四川,泸州,637000;

    四川大学华西医学中心基础医学与法医学院寄生虫学教研室,四川,成都,610041;

    四川大学生物材料工程研究中心,四川,成都,610064;

    四川大学华西医学中心基础医学与法医学院寄生虫学教研室,四川,成都,610041;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 病原细菌;
  • 关键词

    嗜肺军团菌; lvgA基因; Hsp60基因; 重组聚合酶链反应; 基因表达;

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