基于CRISPR/Cas9技术构建TRPV1基因敲除的CACO-2稳定细胞系

王远微; 刘雄

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基于CRISPR/Cas9技术构建TRPV1基因敲除的CACO-2稳定细胞系

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基于CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除人结直肠腺癌细胞Caco-2中的辣椒素受体基因TRPV1,构建TRPV1基因敲除的Caco-2稳定细胞系.使用CRISPR/Cas9在线靶点设计程序在TRPV1基因4个转录本的公共CDS区的第一个外显子DNA区域中设计一对gRNA,将gRNA构建到真核重组表达质粒的载体上,电转染待敲除细胞,经嘌呤毒素抗性筛选和基因测序获得敲除TRPV1基因的稳定细胞系.用Western Blot检测TRPV1基因蛋白表达量验证Caco-2中TRPV1基因的敲除效果,CCK-8检测TRPV1基因敲除细胞的生长曲线,与野生型细胞对比检测TRPV1基因敲除对细胞生长的影响.筛选出TRPV1基因敲除的CACO-2稳定细胞系,而且TRPV1基因敲除对Caco-2细胞生长无显著影响.基于CRISPR/Cas9基因编辑技术成功构建了TRPV1基因敲除的CACO-2稳定细胞系,为后续研究辣椒素对肠道脂类吸收影响的机理研究提供了有利的工具.

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来源
《西南民族大学学报：自然科学版》 |2020年第3期|241-249|共9页
作者
王远微; 刘雄;
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作者单位

西南民族大学生命科学与技术学院;

四川成都610041;

西南大学食品科学学院;

重庆400715;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类细胞生物学;食品营养学;
关键词
TRPV1基因; CRISPR/Cas9; CACO-2细胞; 基因敲除;

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