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中性粒细胞弹性蛋白酶、金属基质蛋白酶9对卵巢癌细胞膜E-cadherin、MUC16表达的影响

         

摘要

目的检测中性粒细胞弹性蛋白酶(neutrophil elastase, NE)、金属基质蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9, MMP-9)对体外卵巢癌细胞膜蛋白E-cadherin、黏蛋白16(mucin16,MUC16)表达的影响。方法体外培养人卵巢癌OVCAR3细胞。温控4℃,MMP-9、NE、0.125%胰蛋白酶分别处理OVCAR3细胞,光镜下观察不同时间段细胞形态学变化;采用Western印迹法检测OVCAR3细胞中E-cadherin、MUC16总体表达;免疫荧光技术定位E-cadherin、MUC16。应用酶联吸附测定技术(ELISA)定量培养基中脱落的MUC16胞外段蛋白。结果 NE、MMP9处理细胞后,细胞形态由平铺鹅卵石样呈细长/纺锤状,细胞间逐渐分离、扩散。NE、MMP9处理24h后E-cadherin表达均显著下降,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),而0.125%胰酶组与对照组之间差异无统计学意义。免疫荧光检测结果检测E-cadherin、MUC16主要定位在细胞膜。ELISA结果显示,MMP-9处理细胞后,上清液中MUC16胞外段CA125的含量明显增高。结论中性粒细胞相关蛋白酶NE、MMP9诱导细胞形态由平铺鹅卵石样呈细长/纺锤状,细胞间逐渐分离、扩散。两者通过酶解卵巢癌细胞膜上E-cadherin,促进上皮间叶转化(epithelial mesenchymal transformation, EMT),细胞间接触和极性的丧失,进一步脱落。此外,MMP-9可以降解细胞膜上MUC16蛋白,使MUC16胞外段脱落,揭示局部MMP-9酶浓度升高与血清学CA125水平有一定关联。

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