β-分泌酶底物肽反转录病毒载体及其包装细胞株的构建

崔媛媛; 胡海涛; 董炜疆; 王兰; 郑慧媛; 赵璇; 石明娟; 吴志新

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目的用pLXSN反转录病毒载体构建介导β-分泌酶底物肽(BACEsp)基因表达的pLXSN-BACEsp反转录病毒载体,并建立高效、稳定表达BACEsp的包装细胞株.方法根据BACEsp基因序列设计引物,PCR合成的BAC-Esp片段和pLXSN载体用EcoRⅠ、BamH Ⅰ双酶切后连接,构建成表达BACEsp的pLXSN-BACEsp反转录病毒载体.用脂质体介导转染PT67包装细胞,经抗性筛选后,挑单克隆扩大培养,用NIH3T3细胞测定病毒滴度,筛选出高效产毒细胞株.结果经酶切、连接后构建成的质粒称为pLXSN-BACEsp,经测序证实构建成功,无任何碱基突变.经脂质体介导转染包装细胞、抗性筛选和测定病毒滴度,筛选出具有高病毒滴度的细胞集落,扩大培养后建立BAC-Esp高效表达的包装细胞株.结论成功构建了能表达BACEsp的pLXSN-BACEsp反转录病毒载体,并建立了稳定、高效地产生有活性的BACEsp产毒包装细胞株.

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来源
《西安交通大学学报（医学版）》 |2007年第6期|624-626|共3页
作者
崔媛媛; 胡海涛; 董炜疆; 王兰; 郑慧媛; 赵璇; 石明娟; 吴志新;
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作者单位

西安医学院组织学与胚胎学教研室,陕西,西安,710021;

西安交通大学医学院人体解剖与组织胚胎学系,陕西,西安,710061;

西安交通大学医学院人体解剖与组织胚胎学系,陕西,西安,710061;

西安医学院组织学与胚胎学教研室,陕西,西安,710021;

西安医学院组织学与胚胎学教研室,陕西,西安,710021;

西安医学院组织学与胚胎学教研室,陕西,西安,710021;

西安医学院组织学与胚胎学教研室,陕西,西安,710021;

西安医学院组织学与胚胎学教研室,陕西,西安,710021;

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正文语种 chi
中图分类人体组织学;
关键词
阿尔茨海默病; β-分泌酶底物肽; 反转录病毒载体; 包装细胞株; 转染;

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